Исследование спермы: виды специальных  тестов

Самым быстрым и относительно недорогим методом оценки качества семенной жидкости является спермограмма: стоимость исследования составляет в среднем около полутора тысяч рублей; результаты обычно предоставляются уже в день сдачи анализа.

Методы преодоления бесплодия у пар с мужским фактором

ЭКО с ИКСИ

Фертильность мужчины условно определяется показателями специального анализа семенной жидкости — спермограммы. Если показатели спермограммы ниже нормы, то эякулят считается субфертильным или стерильным. Причин может быть масса: от стресса до неизлечимых генетических заболеваний. В случаях, когда фертильность восстановить не удается и сперматозоиды самостоятельно не способны оплодотворить яйцеклетку, необходимо прибегнуть к оплодотворению методом ЭКО (экстракорпорального оплодотворения) с манипуляцией ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в яйцеклетку).

Среди обращающихся в клинику пациентов до сих пор распространено ошибочное убеждение, что для оплодотворения яйцеклетки в естественных условиях нужен всего один сперматозоид. На самом же деле их необходимы тысячи, так как яйцеклетка окружена защитными оболочками, которые сперматозоиды расщепляют в результате химических реакций, то есть каждый сперматозоид несет лишь тысячную часть веществ, необходимых для преодоления оболочек яйцеклетки. И только после преодоления всех преград один сперматозоид сможет привнести в яйцеклетку свой генетический материал и оплодотворить ооцит.

Суть ЭКО+ИКСИ заключается в том, что эмбриолог вводит в цитоплазму клетки один специально отобранный сперматозоид. ИКСИ проводится на специальном микроскопе и микроманипуляторах. Далее развитие происходит как в классическом ЭКО, программа заканчивается переносом и криоконсервацией эмбрионов.

Безоговорочными показаниями для ИКСИ являются результаты тестов на выживаемость, жизнеспособность, тестов на связывание с зоной пеллюцида и тестов на иммунологическое бесплодие, а также плохое оплодотворение в классическом ЭКО.

ИКСИ с MICROTESE (микробиопсией придатков и яичек)

Ограничения метода ИКСИ состоят в том, что эмбриологу нужно несколько подвижных морфологически нормальных сперматозоидов. К сожалению, в некоторых ситуациях это невозможно. Например, в случаях азооспермии и криптозооспермии (отсутствия или единичных экземпляров сперматозоидов в эякуляте). В таких случаях пациенту может быть проведена микробиопсия придатков и яичек – MICROTESE.

MICROTESE является менее инвазивной операцией по сравнению c обычной TESE (биопсией), поэтому считается более современным и успешным методом. В этом случае хирург-андролог проводит экстракцию только перспективных семенных канальцев, в которых находятся сперматозоиды, далее эмбриологи обрабатывают биоптат для криоконсервации.

ИСКИ с ИМСИ (инъекция морфологически отобранного сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки)

Стандартное ИКСИ делается при увеличении в 400 раз. Однако это не всегда достаточно информативно для выбора морфологически нормальных сперматозоидов: если процедура не принесла должного результата, то рекомендуется проведение ИКСИ+ИМСИ. Особенность метода – это увеличение в 6300 раз, при котором проходит отбор сперматозоидов.

Читайте также:  Антиспермальные антитела (АСАТ) у мужчин и у женщин

ИКСИ с ПИКСИ

Если у мужчины наблюдаются аномалии в созревании сперматозоидов, то оплодотворение путем классического ЭКО и ЭКО+ИКСИ не даст желаемого результата. В случае, когда имеются подозрения нарушения спермиогенеза, рекомендуется пройти HBA-тест (количественное определение зрелых сперматозоидов в эякуляте). Также доказано, что незрелые сперматозоиды несут в себе большее количество хромосомных аномалий, что может явиться причиной ранних потерь беременности. Выход в этом случае – ИКСИ+ПИКСИ. Это селекция сперматозоидов для ИКСИ, направленная на отбор только зрелых спермиев. Суть метода заключается в использовании гиалуроновой кислоты, нанесенной на специальную чашку для ИКСИ, которая, как сачок, ловит только зрелые сперматозоиды для проведения микроманипуляции.

Причины патологического нарушения

Существуют две внутренние причины, способные вызвать нарушение целостности ДНК в сперме. Первая — это сбои в процессе образования семенной жидкости. Дело в том, что сперматозоиды созревают в придатках мужских яичек. Одновременно с этим происходит активизация хроматинового комплекса, состоящего из молекул ДНК и специфических белков в ядрах клеток. Случается, что этот процесс идёт не так, как положено, в результате происходят многочисленные повреждения генетических цепочек.

В половой системе у мужчин есть природный механизм контроля половых клеток. Каждый сперматозоид проверяется на соответствие стандарту. В случае выявления каких-либо отклонений в строении или в качестве наследственного материала, он выбраковывается и немедленно уничтожается.

Причины патологического нарушения

Случается, что эта защитная система работает неправильно. Может наблюдаться такое явление: когда здоровые экземпляры не проходят контроль и организм от них избавляется, а дефективный материал допускается к участию в оплодотворении. Сперма мужчины с этой патологией неполноценна, так как содержит смесь из повреждённых и здоровых клеток.

Кроме внутренних факторов развития патологии, существует несколько внешних причин:

  1. Острые и хронические заболевания, особенно перенесённые без соответствующей медицинской помощи и не долеченные до конца.
  2. Воспалительные процессы, локализованные в мочеполовой системе, могут очень активно повлиять на репродуктивные свойства человека.
  3. Многие представители сильного пола страдают от варикозного расширения вен, оплетающих яички (варикоцеле). Это распространённое заболевание является главной причиной бесплодия у мужчин. Патологию легко выявить при самостоятельном осмотре, а также по характерным симптомам.
  4. Высокая температура без каких-либо видимых причин, которая длится довольно долго и не проходит.
  5. Оксидативный стресс — множественные повреждения клеток в результате их окисления.
  6. Длительное воздействие ионизирующего излучения, например, рентгеновские лучи.
  7. Курс химиотерапии.
  8. Чрезмерное употребление алкоголя и прочие вредные привычки.

Особенно губительно воздействие курения. Это доказано многими исследованиями.

Причины патологического нарушения

Сейчас существует немало методик для избавления от этой вредной привычки. Будущему отцу желательно отказаться от употребления никотина за 2−3 месяца до зачатия.

Процесс исследования спермограммы

После получения эякулята в лаборатории реализуется следующий комплекс стандартных методик:

  • Фиксируется внешний вид (цвет), прозрачность (характерна для низкой концентрации сперматозоидов).
  • Определяется время разжижения свежесобранной спермы. В норме оно составляет не более часа.
  • Измеряется объем эякулята (с помощью мерного цилиндра, шприца или пипетки).
  • Определяется вязкость (консистенция).
  • Измеряется рН (с помощью индикаторной бумаги или специального прибора).
  • Производятся микроскопические исследования подвижности, концентрации, агглютинации, жизнеспособности сперматозоидов. Определяется наличие в пробе других клеток и включений. При микроскопическом исследовании предпочтительнее использовать фазово-контрастный, а не световой микроскоп.
  • Мазок свежей пробы подвергается морфологическому исследованию.
  • Определяются антитела в пробах свежей спермы.
Читайте также:  Биопсия эндометрия (пайпель, аспирационная): отзывы, цены

Таким образом, для большинства анализов в этом сложном и трудоемком комплексе методик в качестве исходного материала требуется свежеполученная семенная жидкость.

Если в лабораториях используются автоматические спермоанализаторы (QwikCheck Gold, SQA-Visual), допускается работа с замороженной спермой.

Для большинства анализов требуется свежеполученная семенная жидкость

В России (особенно в некоммерческих медучреждениях) технологии автоматического анализа распространены недостаточно, что повышает риск субъективного фактора.

При выборе места, где сделать спермограмму, целесообразно поинтересоваться, делают ли исследование «вручную» или с использованием анализатора, производится ли заморозка, сколько времени проходит между сдачей спермы и проведением анализа.

Подвижность сперматозоидов значительно снижается уже через 2 часа после сдачи семенной жидкости. Описаны случаи, когда ручной анализ показателей свежей спермы, давал лучшие результаты, чем автоматический, но сделанный позже, с отсрочкой для транспортировки и заморозки.

Как улучшить показатели

Иногда женская яйцеклетка самостоятельно может ликвидировать фрагментацию ДНК того сперматозоида, который ее оплодотворил. Такая способность зависит от возраста женщины, качества ее яйцеклетки, количества поврежденных сперматозоидов и типа повреждений.

Проведенные исследования доказали, что прием антиоксидантов способен значительно уменьшить степень фрагментации генетического кода. Однако терапия имеет некоторые исключения. Метод не будет эффективным для мужчин, у которых фрагментация ДНК была вызвана температурным поражением или продолжительным воздействием токсичных веществ.

МАР-тест: уровень антител к сперматозоидам

Этот анализ назначают при:

  • бесплодии;
  • низкой активности сперматозоидов после вазэктомии, травмы яичек или инфекционном заболевании простаты, яичек
  • повышенном уровне склеиваемости сперматозоидов по данным спермограммы.

Этот вид исследования определяет количество так называемых антиспермальных антител, которые повреждают сперматозоиды. В норме сперма не контактирует с иммунными клетками, однако при травматическом воздействии или инфекционном заболевании это правило может быть нарушено. Иммунные клетки начинают атаковать сперматозоиды, считая их «врагами организма». При этом вырабатываются специфические защитные белки, которые и называют антиспермальными антителами. Они могут повреждать сперматозоиды, нарушать их подвижность и провоцировать слипание.

Комментарий эксперта

Если антител много, то они покрывают сперматозоиды «коконом» и препятствуют их проникновению в яйцеклетку. В некоторых случаях антитела могут приводить к агглютинации (слипанию сперматозоидов между собой). При проведении МАР-теста в эмбриологической лаборатории к сперматозоидам добавляют специально обработанные латексные шарики, прилипание шариков свидетельствует о наличии антител.

По современным представлениям не препятствует зачатию уровень антител менее 10%, при уровне более 40-50% вероятность зачатия очень мала и это называют иммунологической формой бесплодия. Уровень от 10 до 40-50% — пограничный, вероятность спонтанного зачатия тем ниже, чем выше уровень антител.

Читайте также:  Гиперстимуляция и долгожданная беременность эко

При иммунологической форме бесплодия рекомендуют использовать ЭКО+ИКСИ, обеспечивающий проникновение сперматозоида в яйцеклетку.

Когда назначается спермограмма с МАР-тестом

Расшифровка спермограммы с МАР-тестом выглядит как положительный результат, то есть более 50 % сперматозоидов покрыты антителами, или отрицательный — менее 50 %. Практикуется одновременное проведение базового исследования эякулята и МАР-теста.С помощью МАР-теста определяется иммунный (аутоиммунный) фактор бесплодия. Иными словами, не воспринимаются ли клетки как чужеродные тела собственным организмом или организмом партнера, что приводит к выработке антител, которые ограничивают движение сперматозоидов. МАР-тест проводится с семенной жидкостью или, при диагнозе азооспермия, с плазмой крови.

Суть методики TUNEL

Многие специалисты рекомендуют исследовать цепочку ДНК именно данной методикой. Исследование позволяет определить количество (в %) поврежденных половых клеток. Исходя из результатов, можно подобрать необходимые способы лечения в целях повысить мужские способности к оплодотворению.

После сдачи эякулята в него добавляются специальные реагенты, и дальнейшее исследование происходит с использованием микроскопа. При этом количество здоровых и поврежденных сперматозоидов четко прослеживается. Опытный исследователь быстро и безошибочно выявит изменение ДНК. Фрагментация спермы в этом случае проявляется в том, что поврежденные половые клетки существенно отличаются по своему внешнему виду.

Результат исследования выдается только квалифицированным специалистом на руки пациенту в виде фотографии с изображением клеток. Важным параметром обследования является процентное соотношение здоровых клеток к фрагментированным. В норме количество поврежденных клеток не превышает 15%.

Прохождение обследования предусматривает ряд обязательных правил. В течение семи дней не принимать горячую ванну и исключить поход в баню. В этот период следует воздержаться от половой связи и отказаться от употребления алкоголя. Сбор спермы производится непосредственно в день процедуры в специальную емкость из пластика. Сделать это можно как в домашних условиях, так и в медицинском учреждении.

Как лечить фрагментацию

Фрагментация ДНК может быть устранена непосредственно самой яйцеклеткой. Это явление объясняется тем фактом, что яйцеклетка имеет способность к восстановлению ДНК у оплодотворившего ее сперматозоида. Но случаи восстановления ДНК единичны. Яйцеклетка может восстановить нуклеиновую цепочку у сперматозоида в зависимости от следующих факторов:

  • процентного отношения поврежденного генетического материала;
  • особенностей и характера повреждения ДНК;
  • особенностей самой яйцеклетки (в данном факторе важное место занимает возраст женщины).

Необходимо помнить, что исследование на целостность ДНК может показать неидентичные результаты через определенный интервал времени. Такого рода исследование на ДНК необходимо обязательно пересдавать в целях уточнения поставленного или предполагаемого диагноза. Как правило, пересдача осуществляется через 2-4 недели.